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SOUTHERN印跡

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發表時間:2020-07-29 16:53作者:武漢新啟迪生物Xinqidibio來源:www.donghu8.com

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1.正常運行凝膠。通常對于南方人基因組學,希望在4-6小時內進行長凝膠(18厘米)電泳。

2.用與分子量標記相鄰的標尺拍照以作為參考。

3.堿轉移緩沖液= 0.5M NaOH(20g / lt),1.5M NaCl(87.66 g / lt)。準備1升用于一種凝膠,再準備750毫升用于其他凝膠。注意該緩沖液非常危險,會造成嚴重的眼睛傷害。小心使用此過程中涉及的大量物品,并戴好防護眼鏡。

4.將凝膠添加到250ml堿轉移緩沖液中,每增加一個凝膠添加125ml。

5.將凝膠放在裝有緩沖液的搖桿上20分鐘。注意必須緩慢攪動低瓊脂糖凝膠以防止撕裂。

6.將剩余的500毫升留在轉移罐中。

請按以下步驟戴手套

7.切成兩塊大的3MM紙(燈芯),并切成兩塊,每塊邊緣上的膠要比凝膠小2mm,再切一塊與膠大小相同的尼龍(Hybond N +,Amersham)。

大膠體(HFI)中膠體迷你膠體

2(14 x 19厘米)2(15.2 x 10)2(9 x 5.2)

2(14 x 32厘米)2(15.2 x 32)2(18.5 x 5.2)

切一疊紙巾,其厚度比凝膠小約2mm。堆棧需要大約6厘米厚。

8.將尼龍預先浸入DDW中,然后浸入堿轉移緩沖液中。

9.添加緩沖液以將儲罐移至平臺高度。將長芯吸濕,放在傳輸緩沖區中,并放入水箱中。

10.將凝膠放在平臺上,然后將勺子放在轉移緩沖液上。添加尼龍,并用手指的背部撫平氣泡。

11.添加2個稍小的3MM過濾器,第一個預濕,第二個干燥。

12.添加一疊紙巾。注意,非常重要的一點是,毛巾的邊緣不要碰到凝膠所坐的燈芯,否則轉印會“短路”。

13.用玻璃或塑料板和重物(最理想的是裝有200-300ml H2O的瓶子)放在堆棧頂部。太大的重量會壓縮凝膠并盡早終止轉移。

14.允許轉移o / n,然后小心地取出紙疊。卸下過濾器之前,請用biro標記過濾器上的孔位置(并注意#1孔的位置)。將濾膜浸入0.5M Tris pH 7.5、1.5M NaCl中5分鐘。從凝膠中取出后。

15.將過濾器添加到200ml 2 X SSC中,并在不攪拌的情況下浸泡5分鐘。

16.取下過濾器,吸干并在80攝氏度下烘烤?在不工作但很熱的情況下,放置2小時或在高壓釜中放置10分鐘。

17.用10毫升Aqua進行預雜交。 b (試劑),1%SDS和100ug / ml將鯡魚精子DNA煮沸20-30分鐘(南部克隆DNA)至數小時(南部基因組)。

18.煮沸3'探針,并加入3ml新鮮的hyb溶液/ SDS / Herring DNA。從袋子中擠出前漿,然后添加探針。密封,避免氣泡并均勻分布探頭。孵育4-6hr +(克隆的DNA)至16-20hr(南部基因組)。根據探針與靶標的同源性,在2至0.2X SSC,0.1%SDS中進行洗滌。


文章分類: 分子技術資料
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