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ICH實驗指南(二)

 二維碼
發表時間:2018-10-11 15:22作者:武漢新啟迪Xinqidi來源:http://www.donghu8.com

方案

脫蠟/補液

在65℃的烘箱中脫蠟1小時。

使用以下一系列洗滌液去石蠟/水合物:兩次二甲苯洗滌(每次5分鐘),然后兩次100%乙醇沖洗(每次5分鐘),接著是95%乙醇,70%乙醇,50%乙醇,30%乙醇,然后在搖床上用H 2 O和TBST洗滌5分鐘。

抗原檢索

將載玻片浸入含有抗原修復溶液的染色皿中。

將蓋好的染色盤放入電飯煲中。加入120 mL d H2O并按“煮”。

當“烹飪”變為“保溫”(約20-30分鐘)時,將染色皿移到工作臺,讓蓋子冷卻20分鐘。

染色

在搖床上用TBST洗滌載玻片5分鐘。

通過用3%過氧化氫覆蓋組織10分鐘來滅活內源性過氧化物酶。

用TBST洗滌載玻片三次(每次在振蕩器上3分鐘)。

用封閉溶液封閉載玻片1小時。

根據說明書的建議,在封閉緩沖液中稀釋一抗。

將一抗應用于每個切片,并在加濕室(4 ℃)中孵育過夜。

用TBST洗滌載玻片三次(每次在振蕩器上3分鐘)。

根據制造商的建議,對封閉溶液中稀釋的二級HRP-綴合的抗兔抗體應用于每個部分;在室溫下孵育1小時。

用TBST洗滌載玻片三次(每次在振蕩器上3分鐘)。

將新制備的DAB底物添加到切片中。

在室溫下將組織切片與底物孵育直至形成合適的染色(通常2-5分鐘)。

用水沖洗切片。

與蘇木精對抗。

用水沖洗切片。

使用100%乙醇(每次沖洗20次浸漬)兩次沖洗使樣品脫水,然后用二甲苯沖洗兩次(每次沖洗30次)。

使用中性樹膠封片劑在載玻片上安裝蓋玻片。


文章分類: 抗體技術資料
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